Χρυσά αντίστροφα PCR Transcriptase αντιδραστήρια R3001 2000U

Χρυσό αντίστροφο Transcriptase R3001 (2,000U)

Χρυσό αντίστροφο Transcriptase

Για την ερευνητική χρήση μόνο

Συστατικά

Αποθήκευση

Αυτό το αντιδραστήριο πρέπει να κρατηθεί σε -30~15°C.

Περιγραφή

Χρυσό αντίστροφο Transcriptase είναι ένα νέο αντίστροφο transcriptase που λαμβάνεται από τη τεχνητή μοριακή εξέλιξη βασισμένη σε μ-MLV (RNase χ) αντίστροφο Transcriptase. Το πρώτο σκέλος του cDNA μπορεί να συντεθεί σε 37~55°C. που χρυσό αντίστροφο Transcriptase περαιτέρω σημαντικά έχει βελτιώσει την ευαισθησία, την ιδιομορφία, τη θερμικές σταθερότητα και την ημιζωή, η οποία είναι πολύ κατάλληλη για την αντίστροφη μεταγραφή των προτύπων RNA με τη σύνθετη δευτεροβάθμια δομή. Χρυσό αντίστροφο Transcriptase έχει την ισχυρότερη δυνατότητα πολυμερισμού και επέκτασης, η οποία μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη σύνθεση του μακροχρόνιου cDNA και την κατασκευή του μεγάλου μέρους της ολόκληρης βιβλιοθήκης cDNA.

Καθορισμός μονάδων

Πολυ (RA)·Οληγο (DT) χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο/εγχυτήρας. Σε 37°C για 10 λ., το ποσό ενζύμου που απαιτήθηκε για να προσθέσει 1 nmol dTTP ως αδιάλυτη στο οξύ ουσία ορίστηκε ως 1 μονάδα της δραστηριότητας (U).

Ποιοτικός έλεγχος

Ανίχνευση υπολειμμάτων Exonuclease: Το U 200 αυτού του single-stranded υποστρώματος DNA προϊόντων και pmol 50 επωάστηκε σε 37°C για 16 χ, και η ζώνη ηλεκτροφόρησης DNA δεν άλλαξε μετά από την ηλεκτροφόρηση ΣΕΛΊΔΩΝ αλλοίωσης.

Ανίχνευση του υπολείμματος ενδονουκλεάσεων: U 200 αυτού του προϊόντος και 0,3 μg του DNA pBR322 επωάστηκαν σε 37°C για 4 χ, και τις ζώνες ηλεκτροφόρησης των πλασμιδίων από η ηλεκτροφόρηση δεν άλλαξαν πηκτωμάτων αγαρόζης.

RNase ανίχνευση υπολειμμάτων: προϊόν 200 U και 1 μg του RNA 293 κυττάρων επωάστηκαν σε 37°C για 30 λ., και η ζώνη ηλεκτροφόρησης του RNA ήταν αμετάβλητη από την ηλεκτροφόρηση πηκτωμάτων αγαρόζης.

E.coli ανίχνευση υπολειμμάτων DNA: το υπόλειμμα νουκλεϊνικού οξέος στο U 60 ανιχνεύθηκε από E.coli gDNA-συγκεκριμένο TaqMan qPCR, και το υπόλειμμα γονιδιώματος E.coli ήταν λιγότερο από 10 αντίγραφα.

Λειτουργική ανίχνευση 1: το ένζυμο 200 U προστέθηκε στο αντίστροφο σύστημα μεταγραφής, 1 συνολικό RNA κυττάρων μg HeLa χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο, οληγο (DT) ₂₃ ως εγχυτήρα, και η αντίδραση διευθύνθηκε σε 50°C για το προϊόν 45 min.1/10 cDNA λήφθηκε για PCR την ενίσχυση του γονιδίου VIN. Η ηλεκτροφόρηση πηκτωμάτων αγαρόζης με EB το λέκιασμα παρουσίασε ενιαία ζώνη 4,6 KB.

Λειτουργική ανίχνευση 2: το ένζυμο 200 U προστέθηκε στο αντίστροφο σύστημα μεταγραφής, 1 συνολικό RNA κυττάρων PG HeLa χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο, οληγο (DT) ₂₃ ως εγχυτήρα, και η αντίδραση διευθύνθηκε σε 50°C για το προϊόν 30 min.1/10 cDNA λήφθηκε για PCR την ενίσχυση του γονιδίου GAPDH. Η ηλεκτροφόρηση πηκτωμάτων αγαρόζης με EB το λέκιασμα παρουσίασε ενιαία ζώνη σημείου ζέσεως 550.

Λειτουργική ανίχνευση 3: το συνολικό RNA 500 κυττάρων NG HeLa ως πρότυπο, οληγο (DT) ₂₃ VN ως εγχυτήρα, αντίδραση 50°C για το προϊόν 45 min.1/10 cDNA λήφθηκε για PCR την ενίσχυση του γονιδίου Polε. Η ηλεκτροφόρηση πηκτωμάτων αγαρόζης, EB που λεκιάζει, μια ενιαία ζώνη 7,1 KB (χρωματογραφία-πλούσιοι) μπορεί να δει.

Θέματα που χρειάζονται την προσοχή

Αποτρέψτε RNase τη μόλυνση

Παρακαλώ κρατήστε την πειραματική περιοχή καθαρή. Τα καθαρές γάντια και οι μάσκες πρέπει να φορεθούν κατά τη λειτουργία. RNase-ελεύθερος θα εξασφαλιστεί για τους φυγοκεντρικούς σωλήνες, εισάγοντας στο σιφώνιο τις άκρες και άλλα αναλώσιμα που χρησιμοποιούνται στο πείραμα.

Επιλογή εγχυτήρων

Το πείραμα συνέχειας είναι PCR

Εάν το πρότυπο είναι ευκαριωτικής προέλευσης, η οληγο DT προτιμάται γενικά, ζευγαρωμένος με την πολυ Α ουρά 3 “ευκαριωτικό mRNA για τη μέγιστη παραγωγή του ολόκληρου cDNA.

Οι συγκεκριμένοι εγχυτήρες γονιδίων (GSP) έχουν την υψηλότερη ιδιομορφία. Εντούτοις, σε ορισμένες περιπτώσεις, το GSP που χρησιμοποιείται για PCR την αντίδραση δεν μπορεί να καθοδηγήσει αποτελεσματικά τη σύνθεση του πρώτου σκέλους cDNA. Σε αυτό το σημείο, η αντίστροφη μεταγραφή μπορεί να ξανακαθεί χρησιμοποιώντας την οληγο DT ή τα τυχαία hexamers.

Τα τυχαία hexamers έχουν τη χαμηλότερη ιδιομορφία, και όλο το RNA, συμπεριλαμβανομένου mRNA, rRNA, και tRNA, θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως πρότυπα για τα τυχαία hexamers. Τα τυχαία hexamers μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως εγχυτήρας όταν έχει η περιοχή στόχων μια σύνθετη δευτεροβάθμια δομή ή ένα υψηλό περιεχόμενο ΑΕΡΙΑΣ ΧΡΩΜΑΤΟΓΡΑΦΊΑΣ, ή όταν το πρότυπο είναι prokaryotic και η χρήση της οληγο DT ή των γονίδιο-συγκεκριμένων εγχυτήρων (GSP) δεν μπορεί να καθοδηγήσει αποτελεσματικά cDNA τη σύνθεση.

Το πείραμα συνέχειας είναι qPCR

Η οληγο DT που αναμίχθηκε με τα τυχαία hexamers οδήγησε στην ίδια αποδοτικότητα σύνθεσης cDNA σε κάθε περιοχή mRNA, που βοηθά να βελτιώσει την αυθεντικότητα και την επανάληψη των ποσοτικών αποτελεσμάτων.

Η βιοτεχνολογία Dongsheng προσφέρει τη διαφορετική σειρά προϊόντων για να σας βοηθήσει να επιτύχετε PCR την επιτυχία. Για τα ένζυμα, η πολυμεράση Taq μας, η πολυμεράση DNA HS Taq, η πολυμεράση DNA FS Taq, η πολυμεράση DNA Pfu και η πολυμεράση DNA Pfu τήξης παρέχουν την υψηλή πίστη, αποδοτικός, PCR ευαισθησίας απόδοση. Έχουμε επίσης τη μακριά πολυμεράση DNA Taq για τη μακροχρόνια PCR απόδοση.