Επιλογή και καθαρισμός Magbeads μεγέθους DNA GDSPure κατασκευής βιβλιοθήκης NGS

Περιγραφή προϊόντων

Επιλογή Magbeads DNA GDSPure
Γάτα. Αριθ.: NC1011, NC1012, NC1013
 
Συστατικά

 
Αποθήκευση
Αυτό το αντιδραστήριο πρέπει να κρατηθεί σε 2-8°C. Μην παγώστε. Η ζωή του προϊόντος στο ράφι είναι 2 έτη εάν κλειστή.
 
Περιγραφή
Υψηλής απόδοσης υπερπαραμαγνητικές χάντρες χρήσης Magbeads επιλογής DNA GDSPure και άριστη αναλογία απομονωτών για να καθαρίσει ακριβώς και να επιλέξει τα τεμάχια DNA από το σημείο ζέσεως 150 στο σημείο ζέσεως 1000 ή ακόμα και μεγαλύτερος. Οι υπερβολικές νουκλεοτίδες, τα άλατα, τα ένζυμα και άλλες ακαθαρσίες που εισάγονται στη λειτουργία της κατασκευής βιβλιοθηκών DNA θα αφαιρεθούν μετά από την απλή διαδικασία πλύσης, ώστε να ληφθούν τα καθαρισμένα τεμάχια, τα οποία μπορούν να χρησιμοποιηθούν άμεσα στις προς τα κάτω εφαρμογές όπως η αλληλοuχία, η υβριδοποίηση, PCR και η ενζυμική πέψη. Η επιλογή Magbeads DNA GDSPure μπορεί να χρησιμοποιηθεί από τα χειρωνακτικά και αυτόματα σχήματα.
 
Εφαρμογή

Επιλογή μεγέθους και καθαρισμός για την αλληλοuχία επόμενης γενιάς (NGS), Sanger που τοποθετούν διαδοχικά, qPCR, ddPCR και microarrays, κ.λπ.
 

Προπαρασκευαστική εργασία πριν από το πείραμα

1. Λύση πλύσης: φρέσκια λύση αιθανόλης 80% (V/V)

2. Eluent λύση: νουκλεάση-ελεύθερο νερό ή απομονωτής TE

3. Δίνη

4. Μαγνητικό ράφι

5. Προκειμένου να εξασφαλιστεί η ακρίβεια της επιλέγοντας σειράς, ο όγκος δειγμάτων DNA πρέπει να είναι ≥ 50 μL

6. Πριν από το πείραμα, πάρτε έξω τις μαγνητικές χάντρες από το ψυγείο και τις θερμάνετε στη θερμοκρασία δωματίου για περισσότερο από 20 λεπτά πριν τη χρήση

Πρωτόκολλα

Η επιλογή μεγέθους του DNA τεμαχίζει μεγαλύτερο από ένα διευκρινισμένο μέγεθος (ενιαίος-πλαισιωμένη επιλογή)

1. Προετοιμάστε το δείγμα DNA 50 μL σε έναν κατάλληλο σωλήνα φυγοκεντρωτών.

2. Προσθέστε έναν ορισμένο όγκο της επαναρτημένης επιλογής Magbeads DNA GDSPure σύμφωνα με τη 1$η αναλογία προσθηκών χαντρών στον πίνακα 1 στο δείγμα. Ήπια φυσήξτε με ένα σιφώνιο για 10 φορές (ή δίνη για τη δεκαετία του '30). Επωάστε τα δείγματα για 5 λ. στη θερμοκρασία δωματίου.

Παραδείγματος χάριν, για να επιλέξετε όλα τα τεμάχια μεγαλύτερα από το σημείο ζέσεως 250 στο δείγμα, προσθέστε (0.80X) τη μαγνητική αναστολή χαντρών 40 μL.

3. Τοποθετήστε το σωλήνα σε ένα κατάλληλο μαγνητικό ράφι για να χωρίσετε τις χάντρες από το υπερκείμενο νερό. Όταν η λύση είναι σαφής, αφαιρέστε προσεκτικά και απορρίψτε το υπερκείμενο νερό με ένα σιφώνιο (μην απορρίψτε τις χάντρες).

4. Προσθέστε 200 μl προετοιμασμένο 80% πρόσφατα της αιθανόλης στο σωλήνα ενώ στο μαγνητικό ράφι. Επωάστε στη θερμοκρασία δωματίου για τη δεκαετία του '30, και έπειτα προσεκτικά αφαιρέστε και απορρίψτε το υπερκείμενο νερό (μην ενοχλήστε τις χάντρες).

5. Επαναλάβετε το βήμα 4 μιά φορά για συνολικά δύο πλυσίματα.

Σημείωση: Να είστε βέβαιος να αφαιρέσει όλο το ορατό υγρό μετά από το δεύτερο πλύσιμο.

6. Στεγνώστε τις χάντρες έως ότου δεν έχει η επιφάνεια των μαγνητικών χαντρών καμία προφανή ερμηνεία ενώ ο σωλήνας είναι στο μαγνητικό ράφι με το καπάκι ανοικτό.

Σημείωση: Όχι overdry οι χάντρες, αυτό μπορεί να οδηγήσει στη χαμηλότερη αποκατάσταση του DNA. Όταν οι χάντρες αρχίζουν να ραγίζουν, είναι πάρα πολύ ξηρές.

7. Αφαιρέστε το σωλήνα από το μαγνητικό ράφι. Διαχωρίστε με εκχύλιση το στόχο DNA από τις χάντρες στο νουκλεάση-ελεύθερο νερό 30-40 μl ή τον απομονωτή TE. Μίγμα καλά με να εισαγάγει στο σιφώνιο πάνω-κάτω τουλάχιστον 10 φορές ή σε έναν αναμίκτη δίνης για τη δεκαετία του '30. Επωάστε για 3-5 λ. στη θερμοκρασία δωματίου.

8. Τοποθετήστε το σωλήνα στο μαγνητικό ράφι. Μετά από 5 λ. (ή όταν η λύση είναι σαφής), μεταφέρετε το υπερκείμενο νερό σε έναν νέο σωλήνα. Η επιλογή ολοκληρώνεται, και το επιλεγμένο DNA μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τα επόμενα πειράματα ή να αποθηκευτεί σε -20°C για πολύ καιρό.

Επιλογή μεγέθους των τεμαχίων DNA στα συγκεκριμένα διαστήματα μεγέθους (Double-Sided επιλογή)

1. Προετοιμάστε το δείγμα DNA 50 μL σε έναν κατάλληλο σωλήνα φυγοκεντρωτών και το ονομάστε ως Α.

2. Προσθέστε έναν ορισμένο όγκο της επαναρτημένης επιλογής Magbeads DNA GDSPure σύμφωνα με τη 1$η αναλογία προσθηκών χαντρών στον πίνακα 1 στο σωλήνα Α. Ήπια φυσήξτε με ένα σιφώνιο για 10 φορές (ή δίνη για τη δεκαετία του '30). Επωάστε τα δείγματα για 5 λ. στη θερμοκρασία δωματίου.

Παραδείγματος χάριν, για να επιλέξετε τα τεμάχια για το σημείο ζέσεως 250 στο δείγμα, προσθέστε (0.80X) τη μαγνητική αναστολή χαντρών 40 μL.

• Τοποθετήστε το σωλήνα Α σε ένα κατάλληλο μαγνητικό ράφι για να χωρίσετε τις χάντρες από το υπερκείμενο νερό. Όταν η λύση είναι σαφής, αφαιρέστε προσεκτικά το υπερκείμενο νερό σε έναν νέο σωλήνα και το ονομάστε ως χάντρες Β. Discard.

4. Προσθέστε έναν ορισμένο όγκο της μαγνητικής αναστολής χαντρών σύμφωνα με τη 2$α αναλογία προσθηκών χαντρών στον πίνακα 1 στο σωλήνα Β. Ήπια φυσήξτε με ένα σιφώνιο για 10 φορές (ή δίνη για τη δεκαετία του '30). Επωάστε τα δείγματα για 5 λ. στη θερμοκρασία δωματίου.

Παραδείγματος χάριν, για να επιλέξετε τα τεμάχια για το σημείο ζέσεως 250 στο δείγμα, προσθέστε (0.20X) τη μαγνητική αναστολή χαντρών 10 μL.

5. Τοποθετήστε το σωλήνα Β στο μαγνητικό ράφι. Όταν η λύση είναι σαφής, αφαιρέστε προσεκτικά και απορρίψτε το υπερκείμενο νερό.

6. Προσθέστε 200 μl προετοιμασμένο 80% πρόσφατα της αιθανόλης στο σωλήνα Β ενώ στο μαγνητικό ράφι. Επωάστε στη θερμοκρασία δωματίου για τη δεκαετία του '30, και έπειτα προσεκτικά αφαιρέστε και απορρίψτε το υπερκείμενο νερό (μην ενοχλήστε τις χάντρες).

7. Επαναλάβετε το βήμα 6 μιά φορά για συνολικά δύο πλυσίματα.

Σημείωση: Να είστε βέβαιος να αφαιρέσει όλο το ορατό υγρό μετά από το δεύτερο πλύσιμο.

8. Στεγνώστε τις χάντρες έως ότου δεν έχει η επιφάνεια των μαγνητικών χαντρών καμία προφανή ερμηνεία ενώ ο σωλήνας είναι στο μαγνητικό ράφι με το καπάκι ανοικτό.

Σημείωση: Όχι overdry οι χάντρες, αυτό μπορεί να οδηγήσει στη χαμηλότερη αποκατάσταση του DNA. Όταν οι χάντρες αρχίζουν να ραγίζουν, είναι πάρα πολύ ξηρές.

9. Αφαιρέστε το σωλήνα Β από το μαγνητικό ράφι. Διαχωρίστε με εκχύλιση το στόχο DNA από τις χάντρες στο νουκλεάση-ελεύθερο νερό 30-40 μl ή τον απομονωτή TE. Μίγμα καλά με να εισαγάγει στο σιφώνιο πάνω-κάτω τουλάχιστον 10 φορές ή σε έναν αναμίκτη δίνης για τη δεκαετία του '30. Επωάστε για 3-5 λ. στη θερμοκρασία δωματίου.

10. Τοποθετήστε το σωλήνα Β στο μαγνητικό ράφι. Μετά από 5 λ. (ή όταν η λύση είναι σαφής), μεταφέρετε το υπερκείμενο νερό σε έναν νέο σωλήνα. Η επιλογή ολοκληρώνεται, και το επιλεγμένο DNA μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τα επόμενα πειράματα ή να αποθηκευτεί σε -20°C για πολύ καιρό.

Πίνακας 1: Συνιστώμενοι όροι για την επιλογή μεγέθους

Σημειώσεις

1. Παρακαλώ διαβάστε την οδηγία προσεκτικά πριν τη χρήση και λειτουργήστε σύμφωνα με τις οδηγίες.

2. Η αιθανόλη στο σωλήνα φυγοκεντρωτών πρέπει να αφαιρεθεί όσο το δυνατόν περισσότερο πριν από την εκλεκτική προσρόφηση για να εξασφαλίσει αποδοτικότητα εκλεκτικής προσρόφησης.

3. Eluent ο όγκος μπορεί να ρυθμιστεί σύμφωνα με τις πειραματικές απαιτήσεις, αλλά περισσότερο από 20 μL.

4. Οι μαγνητικές χάντρες πρέπει να αποφύγουν τις διαδικασίες φυγοκεντρικότητας, παγώματος και άλλου. Πριν τη χρήση, η αναστολή χαντρών μπορεί να αναμιχθεί πλήρως με τη δίνη και άλλες μεθόδους, και να τοποθετηθεί για περισσότερο από 20 λεπτά για να θερμάνει στη θερμοκρασία δωματίου.

5. Αποφύγετε την υγρή ένωση στην κάλυψη σωλήνων κατά τη διάρκεια της δίνης και την εισαγωγή στο σιφώνιο της λειτουργίας για να μειώσει την απώλεια DNA.
 
Το GDSBio είναι μια επιχείρηση υψηλής τεχνολογίας που στρέφεται στην ανάπτυξη, την παραγωγή και το μάρκετινγκ των προϊόντων ποιοτικής βιολογικής επιστήμης. Η επιχείρηση έχει μια πλήρη γραμμή παραγωγής, με PCR την τεχνολογία ως πυρήνα, που εστιάζει συνηθισμένο PCR, φθορισμού ποσοτικό PCR, την κατασκευή βιβλιοθηκών NGS, την ηλεκτροφόρηση νουκλεϊνικού οξέος και άλλες μοριακές τεχνολογίες της βιολογίας, και έχει αναπτύξει τα μοριακά αντιδραστήρια επιστημονικής έρευνας, τις μοριακές τεχνητές διαγνωστικές πρώτες ύλες, τα αντιδραστήρια εξαγωγής νουκλεϊνικού οξέος και ανίχνευσης και άλλα προϊόντα.